上海传秋生物科技有限公司
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技术资料/正文
RAW264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)培养时注意事项
3552 人阅读发布时间:2020-05-14 17:12
RAW264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)
规格:1×10^6/瓶 或1ml冻存管
细胞来源:ATCC
培养条件:DMEM(H)+10%FBS(货号:HN-FBS-500)
细胞特性:贴壁 部分悬浮(圆形)
温度:37℃ 气相:95%空气,5%二氧化碳
运输方式;复苏细胞常温运输/冻存细胞干冰运输
RAW264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)
传代:
1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代,一般2到3天换一次液;
2.待细胞长满瓶底面积80%-90%,需要对其进行传代,传代比例为1:3到1:6;
3.传代步骤:将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶,置于37°孵育消化(第一次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间,记录最佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液,1200rpm离心3min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。
RAW264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)冻存:无血清细胞冻存液(货号:H-W-100)
RAW264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)
注意事项:
1.该细胞对血清质量要求高,推荐使用HAKATA优等胎牛血清。
2.该细胞对外界刺激较为敏感,建议使用新鲜的DMEM高糖培养基,培养基出现发紫现象时不再使用。
3.该细胞贴壁不牢,会有部分细胞悬浮。换液时勿用PBS进行冲洗,悬浮细胞过多时可离心收集再放回原培养瓶。
4.该细胞传代时不用胰酶消化。直接在培养瓶中用1mL移液枪对细胞进行吹打,培养瓶底面每个部位吹打1-2次即可。然后收集吹打下来的细胞,1000r/min离心5min再弃去上清,加入培养基分至3-6个新培养瓶培养。还有未吹打下来细胞的原培养瓶则直接弃去。也可使用细胞刮刀将细胞刮下再分瓶传代。
5.不要让细胞长得过满乃至开始融合。
HAKATA@细胞资源库来源ATCC、DSMZ、 JCRB、 Lonza、 中科院、国家干细胞资源库等,前后引进千余多株细胞种子;坚持细胞来源真实可靠,细胞产品代数靠前,活力优佳,人源细胞提供权威机构的STR鉴定报告。
查询更多细胞株信息,请登录官方网站 www.chuanqiubio,com
规格:1×10^6/瓶 或1ml冻存管
细胞来源:ATCC
培养条件:DMEM(H)+10%FBS(货号:HN-FBS-500)
细胞特性:贴壁 部分悬浮(圆形)
温度:37℃ 气相:95%空气,5%二氧化碳
运输方式;复苏细胞常温运输/冻存细胞干冰运输
RAW264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)
传代:
1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代,一般2到3天换一次液;
2.待细胞长满瓶底面积80%-90%,需要对其进行传代,传代比例为1:3到1:6;
3.传代步骤:将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶,置于37°孵育消化(第一次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间,记录最佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液,1200rpm离心3min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。
RAW264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)冻存:无血清细胞冻存液(货号:H-W-100)
RAW264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)
注意事项:
1.该细胞对血清质量要求高,推荐使用HAKATA优等胎牛血清。
2.该细胞对外界刺激较为敏感,建议使用新鲜的DMEM高糖培养基,培养基出现发紫现象时不再使用。
3.该细胞贴壁不牢,会有部分细胞悬浮。换液时勿用PBS进行冲洗,悬浮细胞过多时可离心收集再放回原培养瓶。
4.该细胞传代时不用胰酶消化。直接在培养瓶中用1mL移液枪对细胞进行吹打,培养瓶底面每个部位吹打1-2次即可。然后收集吹打下来的细胞,1000r/min离心5min再弃去上清,加入培养基分至3-6个新培养瓶培养。还有未吹打下来细胞的原培养瓶则直接弃去。也可使用细胞刮刀将细胞刮下再分瓶传代。
5.不要让细胞长得过满乃至开始融合。
HAKATA@细胞资源库来源ATCC、DSMZ、 JCRB、 Lonza、 中科院、国家干细胞资源库等,前后引进千余多株细胞种子;坚持细胞来源真实可靠,细胞产品代数靠前,活力优佳,人源细胞提供权威机构的STR鉴定报告。
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