原代细胞的提取方法详细步骤：

1)整个操作要在洁净通风的超净台下进行，所有的器材要高压消毒。

2)根据BALB/c小鼠的体重，用10ml/kg3%浓度的戊ba比妥钠麻醉；将小鼠置于盛有75%乙醇的烧杯内，这一步不仅可以消毒，也可以让小鼠体毛浸湿，后续剃去皮毛的时候不会沾到剪刀或组织上。

3)用镊子轻轻挑起小鼠的心脏，装有PBS的注射器插入心尖，同时在右心耳处剪开一个小口，缓慢推动注射器，随着心脏的跳动，将体内的血液冲洗出来。

4)取出小鼠的肺部组织，将肺组织切成小米粒样的大小，置于预冷的HBSS中反复冲洗几次。

5)将小米粒大小的肺组织置于培养瓶中（培养瓶前一天用1%明胶溶液包被培养面，4度过夜，小鼠处理前，将培养瓶放置培养箱中，使其温度恢复至37度），置于培养箱37度的环境下，消化4个小时。

6)消化4小时后，加入培养基（添加培养基，可以是正常培养时的2倍量），继续培养24小时（继续培养的时间可根据细胞贴壁情况适当调整）。

7)24小时后，取出肺组织，镜下观察细胞状态，换液。

8)原代细胞的提取和培养是很慢的过程，一般需等到24小时后，才能在镜下看到些许细胞群，一周到两周后才会看到鹅卵石样的排列情况。

9)原代细胞2-3天换液一次，因为内皮细胞生长形成单层时，会出现接触抑制现象。所以，内皮细胞生长接近单层时就可以传代了，不要等到长得非常满。