一、培养体系出现问题
1.检查你所培养的细胞是否存在污染。
（1）如果培养细胞未添加抗生素，细胞污染则是不可避免的。
①　用肉眼和显微镜进行检查。
②　如果细胞被污染则要弃掉。
（2）由于支原体污染不容易觉察到，因此必须定期检测。
（3）检测可能污染的途径和原因。
2.检查你用于培养细胞的培养基和血清（例如：是否批次不同或厂商不同）。如果你常规使用的是粉剂或10×储存液，而现在购买的培养基更换为1×液体，而随后证明问题就出自于此。
3.如果问题与培养基无关，那么很可能还是细胞的问题。
（1）复苏另一支冻存的细胞，并且与正在培养的细胞加以比较。两种细胞的培养应分开，以免在培养之初就产生污染。随后按（2）～（4）步的方法做排查:
（2）对传代培养的细胞进行计数，并绘制生长曲线，与以前培养该细胞的资料进行比较，检查是否有下列改变:
①　传代时是否接种密度过低。
②　细胞传代是否过于频繁。
③　传代前细胞平台期是否过长。
（3）是否更换了胰蛋白酶或其他分离剂的批号，检查批号和供货商。
（4）是否细胞分离过程中严重损伤了细胞，应检测:
①　胰蛋白酶（其他消化试剂）消化时间是否过长。
②　消化液的浓度和活性是否过高、过强。
③　胰蛋白酶消化时，孵箱温度是否过高。
④　吹打消化细胞时是否过于用力。
⑤　细胞是否对 EDTA过于敏感（如果添加了EDTA）。
⑥　胰蛋白酶稀释是否有误。
⑦　是否使用了一批劣质的胰蛋白酶消化液。

二、检查共用的设备和试剂
温室和孵箱温度
（1）温度和温度设定不准。
①　自动调温器损坏。
②　开关孵箱门过于频繁。
③　孵箱门未关紧。
④　风扇损坏造成散热不均。
（2）孵箱湿度不能维持
①　水盘中未加水。
②　孵箱有渗漏。
③　开关孵箱门过于频繁。
④　在Petri培养皿中放置一定量的PBSA，每日称重，以检查蒸发率。
（3）孵箱的CO2浓度不准
①　开关孵箱门过于频繁。
②　CO2控制器出现问题。