细胞复苏流程：

 

1、将冻存的细胞从液氮罐中取出，立即放入37°C的水浴中进行融化，轻柔晃动，加速融化，直到小瓶中只剩下一小块冰，时长应控制在1min中；

 

2、用70%乙醇擦拭瓶外后转移无菌操作台中，打开瓶盖前，用酒精灯火焰对瓶口进行消毒；

 

3、将预加热的新鲜完全培养基滴入小瓶中。缓慢用移液枪吸取瓶中液体至15ml离心管中，加入适量浓度和体积的完全培养基，轻柔混合均匀；

 

4、200 × g左右细胞悬浮液离心5-10分钟。实际的离心速度和持续时间因细胞类型而异。弃掉上清，加入新鲜完全培养基重悬细胞，并将其转移到适当的培养容器和推荐的培养环境中。

 

注意事项：

 

1、液氮温度低，小心低温对人造成的伤害，在液相中储存的冷冻瓶在解冻时存在爆炸的风险，因此，取出冻存管的时候，要做好个人防护。

 

2、通常细胞集中储藏在液氮中，取出时应迅速，避免温差对其他冻存细胞造成影响。

 

3、复苏细胞的核心技术，简而言之就是快融，将在37°C水浴中快速解冻冷冻细胞(< 1分钟。

 

4、解冻时，冻存管先放入无菌一次性PE手套中，再放入水中融化，避免污染也方便操作。

 

5、用预热过的培养基慢慢稀释解冻的细胞。

 

6、解冻细胞后，在培养皿中培养时，应尽量维持高密度，以提高细胞存活率。

 

7、注意无菌操作，避免细胞发生污染。