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细胞培养技术是生物技术中最核心基础的技术。所以这也是每个科研技术人员必须会的一项技能！那么在培养细胞实验之前您知道需要做哪些准备工作么?

培养基有很多种，你要配制哪一种呢？你要查清楚，你要配的培养基的成分有那些，然后把要用的东西找到。在配制之前你要把装培养基的容器准备好，是用试管、平皿还是三角瓶。之后看要配的是固体培养基还是液体培养基，觉得是否放琼脂或明胶。之后找来一个大烧杯，依次把要放的物质放入，要是配的是固体培养基要把加入琼脂或明胶的培养基放在电炉上加热，待琼脂或明胶完全溶解后趁热迅速分装。之后把分装好的培养基封口，之后选择是干灭还是湿灭，等灭菌之后，配制培养基的工作就完成了。

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血清分为很多类别比如：胎牛血清、小牛血清 、新生牛血清 、透析型胎牛血清 、天然低IGG胎牛血清 、干细胞培养胎牛血清 、特殊用途胎牛血清 、活性炭/葡萄糖处理胎牛血清 、胎牛血清替代物 、加强型小牛血清 、补铁小牛血清 、成牛血清 、供体马血清 、兔血清 、鸡血清 、猪血清 、马血清 、其他动物血清 、合成血清替代品等等，但是每种血清的来源以及用途方法都是有所不同的。那么，我们就来详细的了解一下吧！

细胞冷冻

欲冷冻保存的细胞应在生长良好的指数生长期且高存活率，约为80-90%的汇合度。

细胞生长至高密度时，即须分至新的培养瓶中，一般稀释比例为1:3至1:6，依细胞种类而异。

血清必须贮存于–20～ -70℃，若存放于4℃，请勿超过一个月。如果一次无法用完一瓶，可将40～45ml分装于无菌50ml离心管中，由于血清结冻时体积会增加约10%， 必须预留此膨胀体积之空间，否则易发生污染或容器冻裂之情形。

液体培养基贮存于4℃ 冰箱，避免光照，实验进行前放在37℃ 水槽中温热。0S'、

.细胞培养实验用品均为无菌，除了玻璃容器与pasteurpipet外，其它均为塑料无菌制品。

细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。

在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题， 是什么原因导致，该怎么进行解决？

培养某类型细胞没有固定的培养条件。MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样容易生长。总之，优先MEM、DMEM做贴壁细胞培养；RPMI1640做悬浮细胞培养；新的细胞培养时要详查资料。

通过流式细胞仪分析，间充质干细胞特异性表面抗原有：SH2、SH3、 CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a、CD124。

抗体由于性质和所使用的储存条件不同，其存储的“保质期”可能从几周到几年不等。尽管每个抗体存储的最佳条件是独特的，但我们还是能够总结出一些关于抗体存储建议和一般准则。

L－谷氨酰胺是一种氨基酸，细胞的重要能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。同时L-谷氨酰胺不稳定，在中性的水溶液中会自发降解； 降解产物对细胞有毒性 （对干细胞，原代细胞影响尤其大）。能影响细胞活性、蛋白表达水平及糖基化模式等。那如何解决呢？

无血清培养基是在合成培养基的基础上发展起来的，与传统的培养基相比，既能满足细胞在体外长时间培养的要求，又能避免动物血清所带来的不利因素。无血清培养基的发展历程一般分为无血清培养基（Serum-Free Medium，SFM）、无动物源培养基（Animal Component Free Medium，ACFM）、无蛋白培养基（Protein-Free Medium，PFM）及化学成分限定培养基（Chemically Defined Medium，CDM）等四类。这里所提到的主要指第一类无血清培养基。

干细胞在培养过程中如果环境不适合其生长就会出现部分细胞的老化现象。这是干细胞培养的一个难点也是经常出现的问题。本文描述干细胞老化时出现的迹象，以及其预防措施。

1：保存的时间，血清刚生产后是没有沉淀的，时间越久，析出的沉淀越多； 2：采血后保存运输环节，血清的每一次冻融，都会析出蛋白沉淀，因此，冻融次数多的原料血清，成品后反而沉淀少。

许多细胞系容易适应无血清培养基和无蛋白培养基，而对环境要求过高的其它细胞却难以适应变化，这就需要更为专业的方法来适应变化。而根据细胞系的特性，有两种方法可使细胞适应无血清培养基。第一种方法是连续适应/循序隔绝法；另一种方法是直接适应。